本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
牛（bovine）乳鐵蛋白（ltf）elisa檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（elisa）。往預(yù)先包被乳鐵蛋白（ltf）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、hrp標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乳鐵蛋白（ltf）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（od 值），計(jì)算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：edta、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 奶粉樣本：準(zhǔn)確稱量1g奶粉，加入100ml生理鹽水或者pbs溶解，震蕩均勻，取樣待用。。
4. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標(biāo)儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.濃度為0的s0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
注：標(biāo)準(zhǔn)品（s0-s5）濃度依次為：0、2.5、5、10、20、40mg/ml
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μl；
3.樣本孔先加待測樣本10μl，再加樣本稀釋液40μl；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（hrp）標(biāo)記的檢測抗體100μl，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μl，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的od值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)od值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。
2.靈敏度：檢測范圍0.5-50mg/ml，最di檢測濃度小于0.1mg/ml。
3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6個月
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十余年，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
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實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
elisa試劑盒免費(fèi)代檢測
cck8檢測
he染色
蛋白相互作用分析
western blot
免疫組化ihc染色
熒光定量pcr
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流式細(xì)胞檢測
免疫熒光染色
激光共聚焦
dna甲基化實(shí)驗(yàn)
石蠟/冰凍切片
透射電鏡服務(wù)
掃描電鏡實(shí)驗(yàn)
蛋白雙向(2-d)
動物實(shí)驗(yàn)
免疫共沉淀
原位雜交（fish）
蛋白質(zhì)純化
分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)
組蛋白甲基化磷酸化乙酰化
蛋白雙向2d-wb
藥理毒理動物實(shí)驗(yàn)
番紅o固綠染色
明膠酶譜mmp
酶活性檢測
動物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)